背景介绍:互作转录组测序技术DualRNA-seq
DualRNA-seq是一种先进的技术,专门用于研究宿主与微生物之间的相互作用。该技术无需将不同物种分离,能够在一次实验中同时分析两个或多个互作物种的基因表达动态变化。通过构建互作模型图,研究人员能够揭示不同物种之间基因的调控关系,从而深入理解它们的相互作用机制。最初,DualRNA-seq技术主要应用于研究各种疾病,如感染性肺炎、炎症性肠病、龋齿和牙周炎等常见的慢性感染性疾病。随着研究的推进,该技术逐渐扩展到肠道、呼吸道、皮肤和口腔微生物的研究中,从单纯的原核微生物到真核微生物的互作研究随之展开。此外,植物与微生物的互作研究也逐渐获得广泛关注。
技术路线图:DualRNA-seq实验流程
根据WTetal(2017)的研究,DualRNA-seq的实验流程包括多个关键步骤和产品推荐,旨在保证实验过程的高效与准确:技术应用
DualRNA-seq在医学和农业领域都显示出了广泛的应用前景。在医学领域,该技术被用来研究病原体的致病机制及宿主的免疫应答机制;而在农业方面,它可以用于动植物病虫害的防治和生物共生关系的深入研究。实验方案步骤与产品推荐
尊龙凯时提供了一系列实验所需的产品以支持DualRNA-seq的研究:- 宿主-微生物共提取:MolPure®Magnetic Pathogen DNA/RNA Kit(产品货号18306ES)
- gDNA消化:Deoxyribonuclease I (DNase I) from bovine pancreas(产品货号10607ES)
- rRNA去除或polyA捕获:微生物核糖体去除盒 + 磁珠法被子植物核糖体去除试剂盒(植物-微生物互作)或磁珠法哺乳动物通用核糖体去除试剂盒 + 磁珠法原核微生物核糖体去除试剂盒(动物-微生物互作)(产品货号12262ES + 12264ES或12266ES + 12264ES)
- 总RNA建库:Hieff NGS® EvoMax RNA Library Prep Kit(dUTP)(产品货号12340ES)
- 测序平台:Illumina 或 MGI,建议选择带UMI标签的接头(产品货号13370ES~13371ES(Illumina)/13367ES~13368ES(MGI))
要点强调
DualRNA-seq的成功实施有两个关键点。首先,样本的选择至关重要。需要从被感染样本中提取RNA,但由于寄生微生物的量通常较低,例如从寄生植物的叶片或根茎提取RNA,提取出的大部分仍然是植物本身的RNA。其次是生信分析。在DualRNA-seq的数据分析中,需要进行感染前后的差异比较,并细致分析差异基因在互作中的作用。参考文献
1. Westermann AJ, Barquist L, Vogel J. Resolving host-pathogen interactions by dual RNA-seq. Plos Pathogens, 2017, 13(2): e1006033.2. Wolf T, Kämmer P, Brunke S, et al. Two's company: studying interspecies relationships with dual RNA-seq. Current Opinion in Microbiology, 2017, 42: 73.
3. Marsh JW, Humphrys MS, Myers GSA. Laboratory Methodology for Dual RNA-Sequencing of Bacteria and their Host Cells In Vitro. Front Microbiol, 2017 Sep 21; 8:1830.