尊龙凯时的猪伪狂犬病毒gE蛋白阻断ELISA抗体检测试剂盒使用说明书

产品名称

通用名：猪伪狂犬病毒gE蛋白阻断ELISA抗体检测试剂盒
英文名：Blocking ELISA Kit For Detection Pseudorabies Virus gE Antibody

包装规格

96T×1/盒、96T×2/盒、96T×5/盒

预期用途

伪狂犬病，又称奥耶斯基氏病（Aujeszky's disease），是由伪狂犬病毒（Pseudorabies Virus，PRV）引起的一种急性传染病，主要影响家畜及多种野生动物，表现为发热、奇痒以及呼吸和神经系统症状。用于免疫预防的疫苗通常为gE基因缺失疫苗（也可能包括gI和TK基因缺失）。因此，gE蛋白抗体的检测可以作为野毒感染的指标。本试剂盒可用于猪血清中抗伪狂犬病毒gE蛋白抗体的检测，能够有效区分临床野毒感染的猪和接种gE基因缺失疫苗的猪。

试剂盒组成

| 序号 | 名称 | 规格/96T×1 | 规格/96T×2 | 规格/96T×5 |
|------|----------------------|---------------------|--------------------------|--------------------------|
| 1 | 酶标记物 | 11ml×1(红盖) | 11ml×2(红盖) | 26ml×2(红盖) |
| 2 | 样品稀释液 | 25ml×1(黄盖) | 50ml×1(黄盖) | 125ml×1(透明) |
| 3 | 20X浓缩洗涤液 | 40ml×1(白盖) | 40ml×1(白盖) | 200ml×1(透明) |
| 4 | 底物显色液 | 10ml×1(黑盖) | 10ml×2(棕盖) | 25ml×2(黑盖) |
| 5 | 终止液 | 5ml×1(黄盖) | 10ml×1(黄盖) | 25ml×1(黄盖) |
| 6 | 阳性对照 | 10ml×1(绿盖) | 15ml×1(红盖) | 20ml×1(红盖) |
| 7 | 阴性对照 | 10ml×1(绿盖) | 15ml×1(绿盖) | 20ml×1(绿盖) |
| 8 | 酶标板 | 96T×1 | 96T×2 | 96T×5 |
| 9 | 盖板膜 | 125 | 10自封袋 | 112 |
| 10 | 说明书 | 1 | 1 | 1 |
| 11 | 稀释板 | 125 | | |

储存及有效期

本试剂盒需在2～8℃保存，有效期为12个月。开封后的包被板须在2～8℃避光保存，并避免潮湿，使用期限为2个月。

适用仪器

适用的仪器包括630nm波长的酶标仪、37℃恒温设备以及可调微量移液器。

样品准备

1. 从动物全血中取样，以4000r/min离心10分钟后收集血清；或者自然凝固后收集血清。应确保血清清亮且无溶血。
2. 使用样品稀释液将待检血清以1:1稀释（如100μl血清加入100μl样品稀释液中并混匀）。阴性和阳性对照不需稀释。
3. 使用前将浓缩洗涤液恢复至室温，使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水按20倍稀释为工作洗涤液（如19份蒸馏水加1份浓缩洗涤液）。如发现结晶，可加热使其溶解。建议首先使用血清稀释板稀释待检血清，再将稀释后的血清转移至抗原包被板上，以保证反应时间一致。

检验方法

1. 使用前，将试剂盒在室温下放置30分钟以恢复。
2. 取所需实验的酶标板条，设定阴性和阳性对照各2孔，未用的板条应尽快密封并在2～8℃保存。
3. 在阴性对照孔和阳性对照孔各加入100μl对应的对照液，样品孔每孔加入经稀释的样品100μl。
4. 充分混匀后，盖上盖板膜，放置于37℃避光环境中反应1小时。
5. 把孔内液体甩去，每孔加入300μl工作洗涤液，重复洗涤5次，并在最后一次拍干。
6. 每孔加入100μl酶标记物，盖好盖板膜，在37℃避光环境中反应20分钟。
7. 进行洗涤，步骤同第5步。
8. 每孔加入100μl底物显色液，在室温（20～25℃）避光下反应10分钟。
9. 每孔加入50μl终止液，充分混匀，并在10分钟内于630nm测定各孔的吸光值。

参考值

在正常实验条件下，阴性对照的平均OD值（ODNC）应≥0.6，而阳性对照的平均OD值（ODPC）应≤0.5。

检验结果判定

1. 设样品孔OD630nm值为S，阴性对照OD630nm平均值为N。判断标准如下： - 若S/N≤0.6，则结果为阳性； - 若0.6＜S/N≤0.7，则结果为可疑； - 若S/N＞0.7，则结果为阴性。
2. 实验结果为阳性表明该猪可能感染了野毒，或是接种了非gE基因缺失疫苗。

试验方法局限性

本检测仅供筛查使用，不能作为确诊依据。

注意事项

1. 实验操作时应佩戴手套、穿着工作服，严格遵守消毒和隔离规程，所有实验废弃物应按感染物处理。
2. 终止液具有腐蚀性，避免与皮肤和衣物接触，如不慎接触，需立即用大量流动水冲洗。
3. 若试剂盒中的阴阳性对照、酶标记物出现少量悬浮物属于正常现象。
4. 酶标板应在从冷藏环境中取出后恢复至室温再开袋，未用完的酶标板应放入带干燥剂的密封袋中保存。
5. 浓缩洗涤液在低温下易结晶，使用前应完全恢复至室温以确保溶解。
6. 洗涤时务必将每孔加满液体，以防孔口残留游离酶。
7. 检测的样品应保持新鲜状态。
8. 检验结果的判定应依赖酶标仪的读数。
9. 不同批号的试剂组分不得混用。

使用尊龙凯时的产品，确保在生物医学研究中获得可靠的结果。