### 一、概念

1. **细胞系（Cell Line）**：细胞系是指在原代培养成功完成首次传代后形成的一组细胞，由原代培养中存在的细胞世系（Lineage of Cells）构成。

2. **细胞株（Cell Strain）**：细胞株是通过选择法或克隆法从原代培养物或细胞系中获取的，具有特定性质或标志物的细胞。细胞株的特殊性质或标志物需在整个培养过程中持续存在。若无法持续传代或传代次数有限，则称为有限细胞株（Finite Cell Strain）；若可以连续传代，则称为连续细胞株（Continuous Cell Strain）。对于人类肿瘤细胞，若在体外培养超过六个月且生长稳定，可以称为连续性株或系。

### 二、建立细胞系（或株）的要求

细胞的认可标准因具体情况而异，尚无统一规定。原代培养用的细胞需保证供体的一致性，取材部位及组织种类的稳定性。对于长期培养，尤其是反复传代的细胞，通常需要以下几点说明：

1. **组织来源**：需明确细胞供体的物种、性别、年龄及取材部位或器官。如为肿瘤组织，需提供临床和病理诊断信息及病历号。

2. **细胞生物学检测**：应了解细胞的一般和特殊生物学特性，包括细胞形态、特异结构、细胞生长曲线、分裂指数及倍增时间等。对于肿瘤细胞，需通过软琼脂培养、异体接种致瘤实验及侵润力实验来证明其来源及恶性特征。

3. **培养条件和方法**：应说明细胞系（或株）适应的培养环境，包括使用的培养基、血清种类与用量，以及适宜的pH值。

### 三、细胞建株的要点及基本过程

#### （一）肿瘤细胞培养技术要点

1. **取材**：肿瘤细胞材料主要来自外科手术或活检，选择活性强、细胞集中之处，避免坏死组织。若不能及时培养，可考虑冻结保存。

2. **成纤维细胞排除**：肿瘤组织中通常会有成纤维细胞与肿瘤细胞混杂，这可能影响细胞生长，因此需使用机械刮除、反复贴壁、消化排除等方法，仔细去除成纤维细胞。

3. **提高肿瘤细胞存活率和生长率**：由于肿瘤细胞在体外培养困难，需适应新环境。可采用如鼠尾胶原底层、细胞生长因子（如胰岛素、氢化可的松、雌激素等）或动物媒介培养等特殊措施来提高细胞生长率。

#### （二）人类淋巴母细胞建株方法

1. 在离心管中加入4ml肝素抗凝血和2ml RPMI 1640混合。

2. 缓慢将混合液沿管壁加到4ml淋巴细胞分离液上，静置30分钟。

3. 以1500 rpm离心15分钟，取出第二层的白细胞，转移至新的离心管中。

4. 加5ml RPMI 1640洗涤白细胞两次。

5. 将白细胞接种至1ml RPMI 1640培养基中，加入10μl环胞霉素和100μl EB病毒液，混合均匀。

6. 水浴摇床震荡，设置为40次/分钟，在37℃培养3小时。

7. 继续以1500 rpm离心15分钟，将细胞接种至1ml含1mM谷氨酰胺的培养基中，加入10μl环胞霉素，轻轻混合并在37℃培养。

8. 观察细胞转化和生长情况，一般于5天后进行半量换液，每次1-2次，并维持环胞霉素浓度。

9. 待转化细胞数量明显增加且出现细胞团块后，可转入25ml培养瓶中，加入1-2ml培养基，继续在37℃培养10-15天，定期观察并决定是否换液和传代。

10. 当细胞达到一定数量后进行冻存，并在冻存前进行核型分析和存档。

综上所述，掌握细胞系的建立与培养方法对生物医疗研究至关重要。而尊龙凯时致力于为广大研究者提供高质量的细胞培养解决方案，助力医疗科研进展。