原代细胞培养是指直接从机体提取细胞、组织和器官后进行的培养，严格来说，这种培养是在成功传代之前进行的，此时细胞保持其原有的基本特性。如果是正常细胞，它们通常仍然保持二倍体数。原代细胞能够真实反映特定细胞在体内的生理状态，但一般在经过少量传代后就会停止增殖并最终死亡。因此，对于一些需要大量细胞进行的实验，例如生化分解和遗传筛选等，原代细胞无法满足需求。这就使得在体外建立永生细胞以研究细胞生长、分化和衰老变得尤为重要。本文将介绍尊龙凯时公司中乔新舟所开发的从原代培养到建立永生细胞系的方法。

方案一：SV40 Large T介导的永生化细胞

许多病毒基因会影响细胞周期。目前常用的方法是使用SV40T抗原诱导永生化。SV40T抗原被验证为细胞永生化最有效的试剂，且其机制相对容易理解。SV40（猿猴病毒40）编码两种肿瘤抗原：大T抗原和小T抗原。大T抗原是细胞转化启动所必需，并且维持转化细胞表型必须有其持续表达。虽然小T抗原对细胞转化不是必需的，但可起到增强作用。因此，SV40 Large T能够使细胞进入永生化的增殖状态，但其潜在的致癌风险也是不可忽视的，可能导致细胞恶性转化。

方案二：hTERT介导的永生化细胞

端粒中含有一种逆转录酶（TERT），它能催化端粒DNA的合成，从而维持端粒的长度，促使细胞持续生长。然而，正常细胞通常不表达TERT。为了实现细胞的永生化，需要应用转基因技术构建表达载体，将hTERT转染到细胞中，以激活端粒酶活性，维持端粒长度，阻止染色体端粒降解。这种方法确保了在高传代数和使用致癌基因时，hTERT永生化细胞能够忠实代表体内正常细胞的生理特性。

方案三：复合型病毒感染介导的永生化细胞

在某些细胞类型中，仅使用单一的永生化方法可能无法获取永生细胞，或某些细胞不适合端粒酶介导的方法，因此结合抑制细胞周期和hTERT的表达，将是更佳选择。这需要利用复合型病毒感染，通过慢病毒转染方式同时引入SV40T和hTERT基因，从而结合两种方法的优点，同时保留原始细胞特性，避免核型发生变异。尊龙凯时提供多种永生化细胞系，例如人胰腺星状细胞和人肝内胆管上皮细胞等。

永生化细胞的应用领域

永生化细胞在多个领域中发挥着重要的作用：
1. 药物筛选和开发：永生化细胞是药物筛选和毒性测试的理想模型，能够快速大规模地评估药物的有效性和安全性。
2. 基因研究和功能验证：长期增殖的特性使其成为研究基因功能和细胞信号通路的重要工具，特别是在基因表达调控和癌症领域。
3. 癌症研究：许多永生化细胞系源于癌细胞，其特性使其成为研究癌症发生、发展及治疗的关键模型，帮助科学家理解癌症的生物机制。
4. 抗体生产：像CHO细胞等永生化细胞广泛用于单克隆抗体和重组蛋白的生产，对生物药物的发展具有重要意义。

尊龙凯时不仅提供上百种人源及动物源的永生化细胞株，还提供多个永生化细胞培养基，满足科研工作者的需求。