在上一次的干货分享中，我们探讨了Western Blot实验中蛋白浓度测定的四种方法。本篇分享将着重讨论样本制备过程中常见的问题，并探讨解决方案。

问题一：蛋白浓度低

低蛋白浓度可能由以下原因引起：第一，细胞或组织量偏少；第二，样本与裂解液的比例不合适；第三，样本未能充分裂解；第四，选择的蛋白浓度测定方法不当。

解决方案：

• 增加样本量，以确保获得足够的蛋白质。
• 根据样本量调整裂解液的比例，例如，针对100万细胞或20mg组织，添加100-200μL的裂解液。
• 确保裂解时间充足，通常在低温下进行10-30分钟。组织样本可借助物理破碎，而细胞样本则需轻轻吹打或颠倒混匀。
• 选择适合的蛋白浓度测定方法，以提高准确性。

问题二：出现透明胶状物质

这种现象通常是由于基因组复合物的释放。

解决方案：

• 可以适当进行超声处理，或使用1mL注射器反复抽吸，以打断基因组DNA，消除粘稠感。
• 在加入载样缓冲液进行加热变性时，可适当延长加热时间。这不仅能充分释放结合于基因组DNA上的蛋白质，还能促使基因组DNA部分断裂，减少粘稠性。
• 在裂解过程中，可以在裂解液中添加广谱核酸酶，以进一步减少粘性。

问题三：样本上清漂浮一层油脂

这种现象通常与样本中脂肪含量过高有关。

解决方案：

• 裂解后，可将样本在低温下静置，借此吸出漂浮的油脂。
• 若吸取后仍未达到理想效果，可以尝试使用二氧化硅进行吸附，以去除多余的脂质。

通过以上分析和解决方案，希望能帮助各位研究者在进行Western Blot实验时更有效地进行样本制备，确保实验结果的准确性。对于注重实验质量的科研团队来说，尊龙凯时是您值得信赖的合作伙伴。